自体NK细胞的I期研究用于治疗复发性髓母细胞瘤和室管膜瘤患儿

除了原发部位复发外，三名患者还患有LMD。

安全性评估

这是第一项证明112次脑室内NK细胞输注（98 次通过第四脑室，14次通过侧脑室）的安全性的研究，没有DLT。AE见表 2。

一名接受过多种先前治疗的患者在基线时出现1级血小板减少症，在NK细胞输注期间增加到2级，并在7天内恢复到基线 1 级。骨髓评估没有显示异常病理的证据。实现了主要目标，这证明了NK细胞生产、释放和脑室内输注的安全性的可行性。

影像评估

图2 (A-C) 患者8：对比后T1加权MR图像显示右额叶不规则的脑室内和脑室周围增强肿瘤。

(A) 输注前肿瘤大小和特征。

(B) 第5次输注后，肿瘤呈不规则环状强化，中央坏死。

(C) 输注后10天，肿瘤大小继续最小化，增强增强。

图2(D-F)患者9：通过后颅窝的增强后T1加权图像显示沿Luschka右孔居中至桥脑延髓池的强化髓母细胞瘤，侵犯相邻脑桥和右小脑中脚。

(D)NK细胞输注前的对比后T1图像。

(E) 2次NK细胞输注后的对比后图像。肿瘤的大小增加了9%。

(F) 第二次NK细胞输注后30天的对比后图像显示肿瘤大小保持稳定。

CSF评估和生物标志物相关性

对于发生术后假性脑膜膨出的患者7，第3周期输注2的CSF的CyTOF分析显示来自第四脑室的样本中NK细胞占主导地位，其表型与假性脑膜膨出不同，具有显性分化簇(CD)57 和NK组2成员D(NKG2D) 表达（图 4A）。

SPADE（密度归一化事件的生成树进展分析）的分析揭示了广泛的 NK 细胞亚群。值得注意的是，一部分CD16+NKp30+ NK 细胞表现出高表达的活化标记物（人类白细胞抗原 D 相关[HLA-DR+]、CD69+和CD25+）（图 4B）。

影像学分析

第一项评估放射组学在儿科过继免疫治疗中的作用的研究确定了从7名患者的NK 细胞未治疗MRI扫描中提取的放射组学特征。7名患者中有5名的放射学反应是可评估的；如前所述，排除了患者1和5。实现了高放射学性能；准确性、敏感性和特异性均为100%，但未达到统计学显着性，可能是由于患者数量少（补充图4A）。无监督层次聚类方法同时将患者和特征聚类为子聚类，产生患者分层标签和低维特征表示。如补充图4B所示，我们确定了2个基于放射组学的集群，它们分别与2名患者（一名患有SD，另一名具有放射学反应）和那些患有进行性疾病的患者重合。

众所周知，NK细胞在抗肿瘤免疫中发挥重要作用，如各种人类癌症所示。NK细胞作为抗脑肿瘤效应物的潜力已在体外和体内得到证实。使用NK的临床研究细胞已经在脑肿瘤中进行了研究，但迄今为止还没有在儿科神经肿瘤学中进行过探索。NK细胞表达大量受体，这些受体在识别靶细胞上的特定配体时触发NK细胞的溶细胞活性。髓母细胞瘤上调NK细胞激活受体（如NKG2D和天然细胞毒性受体）的配体，从而诱导NK细胞介导的髓母细胞瘤细胞的细胞毒性和凋亡。

髓母细胞瘤和其他儿童脑肿瘤中NKG2D配体表达的增加促进了NK细胞介导的免疫监视减少，并有助于创造一个免疫抑制性较低的肿瘤微环境。这种现象可能会改善小儿脑肿瘤中NK细胞的运输和功能。

如前所述，我们的临床前工作表明NK细胞在髓母细胞瘤和非典型畸胎样横纹肌样瘤中具有细胞毒性。鉴于局部给药途径和不良免疫反应的可能性，我们以较低剂量开始多次输注。实现了可行性/安全性的主要目标。

该研究还评估了基于成像的抗肿瘤活性作为次要目标。患者8在证明PD之前有一个短暂的SD（有放射学变化）。除了患者9在随访期结束时出现SD外，所有患者在治疗期间和/或治疗结束时均表现出病变大小的增加和/或临床下降。

使用流式细胞术和CyTOF进行的脑脊液分析显示NK细胞的积累和持久性以及CD3+ T细胞的流入，表明冷冻保存的细胞保留了活力和功能。在这里，在一些足够大的样本中，可以进行深入的CyTOF分析，观察到T细胞成分同样包含CD4和CD8 T细胞，以及非常少的CD25+CD127− 调节性T细胞成分，表明注入的NK 细胞促进效应T细胞迁移到脑脊液中。反复输注冷冻保存的NK细胞也与NK细胞的持久性和积累有关（如 CSF 生物标志物评估所示）。

我们使用自体NK细胞启动了这项试验，以证明通过鞘内途径递送的扩增NK细胞的安全性。尽管是I期单药治疗安全性/可行性研究，患者人数少，NK细胞剂量水平和间隔多，研究持续时间有限，3个周期，这排除了将PD与PsD区分开来，但目前的试验证明了该方法的安全性。

然而，产生患者特异性自体产品所固有的成本、治疗延迟和有限的剂量是显着的。使用自体NK细胞的潜在问题，包括冷冻、解冻，以及与同种异体细胞相比它们的功效降低，现在已经为人所知。除了由于暴露于转化生长因子β、色氨酸代谢物、腺苷和慢性刺激而导致自体NK细胞功能低下和耗竭之外，还可以选择同种异体NK细胞通过杀伤性免疫球蛋白样受体(KIR)获得额外的抗癌功能。配体错配和高活化KIR含量。因此，在未来的试验中，有必要在这种情况下对来自同种异体来源的 NK 细胞进行安全测试。