间充质干细胞来源的细胞外囊泡的治疗潜力 | 德国埃森大学

本文作者Fabiola Nardi Bauer等来自德国埃森大学医院输血医学研究所，原文标题Therapeutic Potential of Mesenchymal Stromal Cell-derived Small Extracellular Vesicles，此前发表在Biomaterials Science上。

细胞外囊泡 (EVs) 是由多种哺乳动物细胞类型分泌的膜囊泡，已被证明在细胞间通讯中发挥重要作用。EVs 的内容，包括蛋白质、microRNAs 和 mRNAs，根据分泌它们的细胞类型而有所不同。

因此，研究人员已经证明，源自各种细胞类型的 EV 在生物学现象中发挥着不同的作用。考虑到间充质干细胞 (MSCs) 在体内无处不在，MSC 衍生的 EVs 可能参与广泛的事件。特别是MSCs 最近因其分泌因子的治疗作用而备受关注。因此，MSC 衍生的 EV 可能会提供新的治疗方法。

小细胞外囊泡 (sEV) 

小细胞外囊泡 (sEV) 是尺寸低于 200 nm 的生物纳米颗粒，几乎所有细胞都会释放并在所有体液中检测到。以特定细胞类型的方式组装，至少一部分 sEV 可以将复杂信息从发送到特定选择的目标细胞。根据它们的起源，信号 sEV 可以调节生理和病理生理过程。

例如，从间充质干细胞 (MSCs) 释放的 sEV 在越来越多的不同疾病中介导治疗活性。尽管它们的具体作用机制 (MoA) 以及它们的作用部位 (SoA) 尚未得到充分剖析，但 MSC-sEV 显然以多模式方式发挥作用。

有证据表明，作为其治疗活动的一部分，MSC-sEV 制剂可以将免疫（促炎性免疫反应）调节为调节性/耐受性免疫反应，促进血管生成和促再生过程，并以抗凋亡方式作为以及恢复功能。在这里，作者总结了发现 MSC-sEV 治疗活性背后的历史、它们的一些治疗应用领域以及与它们有效转化为临床相关的挑战。

1.1 再生医学的概念

退行性疾病通常与不可逆的组织损失有关。在这种情况下，人们普遍认为，通常控制组织稳态的内源性干细胞和祖细胞的潜力不足以促进组织再生。因此，具有与内源性干细胞相当的发育潜力的干细胞和/或祖细胞已被应用于不同的临床前模型以及患有退行性疾病的各种不同的患者群体。

在 2000 年代初期，随着对干细胞生物学的发展呈指数增长，许多观察结果表明体干细胞具有可塑性，即体干细胞产生远远超出其正常发育途径的分化细胞的能力。

例如，观察结果表明，在适当的外部条件下，未成熟的脑细胞可以产生血细胞，反之亦然。间充质干细胞 (MSC) 尤其成为一个有吸引力的研究对象。MSC 样成纤维细胞最初是由 Friedenstein 及其同事在 1960 年代后期描述的。

这些成纤维细胞样细胞最初是从成人骨髓中生长出来的，可以很容易地扩展为塑料贴壁细胞。在分化试验中，它们可以向成骨、脂肪和软骨细胞谱系发展，这些谱系都是中胚层衍生物，从而发挥了间充质干细胞的潜力，而间充质干细胞的存在是以前预测的。

很快，MSCs 可以从各种组织中培养出来。类型包括脂肪、脐带、脐带血和胎盘组织。此外，一些 MSC 类型，包括中胚层成体祖细胞 (MAPC) 和非限制性成体干细胞 (USSCs) 以体干细胞的形式出现，其胚层跨越发育潜力可与多能胚胎干 (ES) 细胞相媲美。

然而，与 ES 细胞相比，MSC 细胞没有显示出致畸潜能，并很快被认为是退行性疾病的治疗剂。身体并受环境因素的引导，成为受影响组织的家园并分化以取代丢失的细胞类型。

由于 MSC 还分别产生了模拟神经元或心肌细胞特征的细胞，它们很快被讨论为用于急性疾病（如缺血性中风和心肌梗塞）的同种异体现成产品。因此，研究小组开始研究它们与同种异体免疫细胞的相互作用。虽然最初假设 MSC 原则上会被拒绝，但它们被证明可以调节不同类型免疫细胞的活性。

具体来说，不需要直接的细胞间接触，它们被发现可逆地抑制受刺激的 CD4 和 CD8 T 细胞的增殖 12-15 并促进调节性 T 细胞的产生、募集和调节。MSCs 还有效抑制B 细胞和单核细胞衍生的树突状细胞的分化。

此外，MSCs 抑制 IL-2 诱导的 NK 细胞的增殖并阻止 NK 细胞活化，下调 NKp30 和 NKG2D 受体。因此，MSCs 抑制各种类型的免疫效应反应和促进调节性免疫细胞功能。结合这些功能，它们分泌许多不同的可溶性因子，包括已知可调节免疫反应的细胞因子，如转化生长因子 β1 (TGF-β1)、肝细胞生长因子 (HGF)、色氨酸降解酶吲哚胺 2, 3-双加氧酶 ( IDO)、前列腺素 E2 (PGE2) 和人类白细胞抗原 (HLA) I 类分子 G (HLA-G)。

因此，除了它们在退行性疾病治疗中假定的细胞替代潜力外，MSCs作为炎症性疾病的治疗剂，特别是急性移植物抗宿主病（aGvHD）的治疗剂越来越多地被讨论。

急性 GvHD 是由同种异体免疫细胞作为同种异体造血干细胞 (alloSC) 移植到清髓患者的一部分而触发的。需要联合移植包括 T 细胞在内的免疫细胞，以在 alloSC 移植前消除未通过清髓治疗方案根除的残留肿瘤（白血病）细胞。

因此，alloSC 移植提供了一种联合的再生和免疫治疗方法。尽管该疗法可以治愈，但高达 50% 的接受 alloSC 移植的患者会发展为轻度至重度的 aGvHD；严重的形式与高死亡率相关。

一线 aGvHD 患者接受类固醇治疗，这种类固醇是淋巴溶解的，可以成功抑制大约一半 aGvHD 患者的疾病诱导 T 细胞功能。对于其余的类固醇难治性 aGvHD 患者，到目前为止，尚未批准二线治疗。

MSCs 已经并且仍然被认为是类固醇难治性 aGvHD 患者的潜在二线治疗剂。事实上，在 2004 年，Katarina Le Blanc 和她的团队成功地用同种异体 MSC 治疗了一名 9 岁的类固醇难治性 aGvHD 患者。

从那时起，美国国立卫生研究院 (NIH) 已经注册了 1200 多项临床 MSC 试验，其中大多数打算将 MSC 作为再生或免疫治疗剂应用于不同的患者群体 (clinicaltrials.gov)。

从 2006 年到 2009 年，进行了第一个 3 期临床试验（NCT00366145；[Remestemcel-1]）以评估人 MSCs 作为类固醇难治性 aGvHD 的二线治疗的疗效。尽管报告了 Remestemcel-l 的安全性，但在 Remestemcel-l 组和安慰剂组中，超过 28 天的总体反应率是相当的。

然而，对儿科 aGvHD 患者或具有高 aGvHD 风险的患者的临床研究显示，MSC 的结果更好-治疗组比安慰剂治疗组。因此，已经进行了一项单臂和前瞻性的 3 期临床研究 (NCT02336230)，以治疗类固醇难治性儿科患者的 Remestemcel-l。

MSC 产品的剂量为 2 × 10E6 个细胞 kg-1 体重，并在 4 周内每周两次施用。在 MSC 治疗组中，74% 的患者在第 28 天后表现出改善。相比之下，在对照组中，只有 45% 的患者的 aGvHD 症状在第 28 天后得到改善。总体反应改善在很大比例下得以持续在第 180天后确认改善的患者中，不过，除了日本以外，日本已获得商业 MSC 产品 (TEMCELL) 用于 aGVHD 治疗的许可，并有条件地临床批准使用另一种商业 MSC 产品 Prochymal 治疗儿科 aGvHD。

1.2 MSCs 以旁分泌而非细胞方式发挥作用

从观察到 MSCs 可以在没有物理细胞间接触的情况下介导 T 细胞增殖的抑制，再加上它们分泌各种细胞因子的事实，多年来很明显，MSCs 通过其分泌组发挥其治疗功能的比例，在促再生和免疫治疗方法中。

最初，调查细胞是否需要移植到受影响的组织以实现其治疗效果的研究表明，在大多数情况下，全身给药的 MSCs 最终进入治疗动物的肺部，并且很少在其假定的靶组织中大量回收。

例如，Darwin Prockop 小组证明，静脉注射人 MSCs 可改善小鼠心肌梗塞后的心脏功能。具体来说，应用的 MSCs 减少了炎症反应，减少了梗死面积并改善了心脏功能。

在通过筛选动物探索施用的人类 MSCs 的生物分布后，人类 DNA 几乎完全在动物的肺中检测到，而在其他组织中仅少量检测到。此外，被困在肺中的 MSC 显示出分泌 TNF-α 诱导的蛋白 6（TNAIP6 或 TSG-6），一种抗炎细胞因子。

随后将重组 TSG-6 施用于梗塞小鼠的实验证实，施用 TSG-6 可降低心肌梗塞诱导的炎症反应并减少梗塞面积。支持 TSG-6 的重要作用，siRNA 介导的 TSG-6 表达敲低后的人类 MSC 未能改善心肌梗塞的大小。

相比之下，发现 MSC 给药可改善诱导的急性肾损伤，而无需大量移植到受影响的器官中。应用的 MSCs 的再生作用与胰岛素样生长因子-1 (IGF-1) 的分泌有关。经基因改造以沉默 IGF-1 表达的 MSCs 限制了 MSCs 的促再生作用。因此，很明显，与最初的假设相反，MSCs 几乎不归巢于受影响的器官和组织以取代丢失的细胞类型，而是通过它们改善临床症状分泌组。

由于这些和相关观察，最初提出的 MSCs 的干细胞相关特征受到质疑。因此，MSCs 目前优选定义为“间充质基质细胞”而不是“间充质干细胞”。最近，MSC 先驱之一阿诺德·卡普兰（Arnold Caplan）建议根据其旁分泌作用机制更准确地将它们定义为“医学信号细胞”。不管缩写“MSC”最终的首选定义是什么，它都有成为确定发挥 MSCs 促再生/免疫调节活性的活性成分的主要目标。

1.3 MSC-EVs 通过细胞外囊泡介导其治疗作用

考虑到旁分泌活动介导 MSCs 的治疗效果，许多研究探索了 MSC 衍生的条件培养基 (CM) 的治疗效果。事实上，MSC-CM 在不同的小鼠心肌梗塞模型中显示出介导心脏保护作用。

科学家Gnecchi 及其同事证明，经过改造以表达高 Akt 水平的 MSC 的 CM 可促进心肌组织修复和功能改善。调查由 Timmers 及其同事进行，他们通过过滤对 MSC-CM 进行了分级，并发现只有未分级的 MSC-CM 和未通过 1000 kDa 过滤器的部分含有心脏保护活性，特别是减少梗塞面积和改善心脏收缩和舒张的活性。随后，作者通过透射电子显微镜证明了这些部分中存在大小为 55-65 nm 的泡状颗粒。同时，证实存在外泌体标记蛋白，即 CD9、CD81 和 Alix。因此，作者将囊泡颗粒称为外泌体。

与心肌梗塞模型中的效果相似，Bruno 及其同事观察到，通过离心分离人骨髓来源的 MSC-CM 后，活性在超速离心颗粒中恢复。该部分的透射电子显微镜表征显示存在大小从 80 nm 到 1 µm（平均 135 nm）的囊泡颗粒，作者将其破译为微泡。

与 MSC 本身相比，含有囊泡的部分是能够在体外降低细胞凋亡率并增加肾小管上皮细胞的增殖。在体内，MSCs 和由 MSC-CMs 制备的富含微泡的级分在严重联合免疫缺陷 (SCID) 小鼠中对甘油诱导的急性肾损伤 (AKI) 的功能和形态恢复显示出相当的功效。Sai Kiang Lim 和 Dominique de Kleijn 小组以及 Giovanni Camussi 小组的这些开创性研究相互补充，首次暗示小细胞外囊泡 (sEVs) 发挥 MSCs 的治疗作用（图 1.1）。

图 1.1 MSC 通过它们的 EV 发挥作用，这些 EV 可以从 MSC 条件培养基中收获。与 MSC 一样，制备的 MSC-EV 可抑制疾病相关过程并以多模式方式促进再生。

1.4 MSC-sEVs 改善许多不同疾病模型中的疾病症状

由 MSC-CM 制备的 MSC-sEV 与其亲本 MSC 一样具有治疗效力，这一发现为新型无细胞疗法提供了新的视角。与细胞疗法相比，基于 sEV 的疗法提供了几个假设的优势，例如EV 缺乏自我复制潜力，这在细胞疗法中可能导致肿瘤形成。重要的是，由于它们的尺寸小，在 sEV 制剂中小于 200 nm，sEV 产品可以通过过滤进行灭菌。此外，整体处理和储存不如细胞复杂。

最终，sEV 产品也可以由不能用于临床应用的永生化细胞系细胞生产。因此，sEV 的生产可能会扩展到工业水平，这对于细胞疗法来说是不可能的。尽管如此，仍有一些问题需要解决；除其他外，sEV 疗法需要与细胞疗法一样有效。

为此，研究人员使用缺血性中风的小鼠模型证实，在该模型中，系统性施用的 MSC-sEV 制剂也可将中风后症状改善到与其亲代细胞相当的程度。两者都通过促进神经发生和血管生成来诱导神经功能恢复。

此外，还分析了施用 MSC-sEV 制剂对外周血成分的影响。值得注意的是，与人类一样，缺血性中风在缺血性中风小鼠中诱导白细胞减少，残留的 T 细胞显示出活化的表型，指出有助于免疫调节作用，在用 MSC-sEV 制剂治疗的缺血性中风小鼠中，白细胞减少的程度降低了并且 T 细胞的活化表型受到抑制。

在一项正在进行的研究中表明，MSC-sEV 制剂的施用也减少了中性粒细胞和其他白细胞向缺血性病变部位的侵袭。值得注意的是，中性粒细胞耗竭导致与 MSC-sEV 制剂的给药相当的改善，并且还抑制了其他白细胞侵入梗塞区域。

事实上，在中性粒细胞耗竭的缺血性脑卒中给予 MSC-sEV 制剂时没有观察到额外的益处中风小鼠意味着 MSC-sEV 至少通过调节中风后动物的中性粒细胞发挥其治疗作用的很大一部分。目前，这些作用是直接还是间接发挥仍然是一个悬而未决的问题。

MSCs 及其 EVs 的逐点比较也在大鼠脊髓挫伤模型中进行。两者都被证明在减少受伤后长达 2 周的神经炎症水平方面同样有效。此外，在脊髓损伤后立即给予 MSC-sEV 制剂可降低继发性损伤早期脊髓实质中促炎细胞因子的表达。

除了这些逐点比较之外，MSC-sEV 的治疗潜力已在越来越多的不同临床前模型中获得批准。例如，在神经系统中，在大鼠缺血性中风模型、坐骨神经再生小鼠模型、脊髓损伤大鼠和恒河猴皮质损伤模型中也观察到了施用 MSC-sEV 制剂的积极作用。

其他研究人员观察到施用 MSC-sEV 制剂对新生儿脑损伤的治疗效果。此外，在新生儿环境中，MSC-EVs 对新生儿肺损伤的有益作用被描述。治疗效果MSC-sEV 制剂在急性和慢性肾损伤模型上的研究被多个小组研究；MSC-EV 研究的早期阶段已经报道了积极的影响。

MSC-sEV 给药可以改善其他器官损伤，包括肝脏、成人肺和肌肉损伤模型。此外，MSC- sEV 制剂被发现可促进严重肢体缺血大鼠模型的血流、皮肤烧伤愈合和同种异体皮肤移植物的存活。最近，局部应用的 MSC-sEV 制剂被证明可以减轻噪音引起的毛细胞损失，部分缓解恢复听力损失。还有许多其他应用程序，我们很抱歉只提到一小部分，并且只引用了一小部分，尤其是最近发表的研究。

1.5 MSC-sEVs已成功应用于患者

再加上有希望的临床前数据，MSC-sEV 也越来越多地被考虑用于人类的治疗应用。起初，MSC-sEV 被用于对患有难治性 aGvHD 的患者进行个体化治疗。在 2 周的时间里，MSC-sEV 被证实可以在体外调节患者免疫细胞的促炎反应，并以 2 天或 3 天的间隔进行静脉内输注。MSC-sEV 治疗显着改善了 GvHD 症状，使患者稳定超过 4 个月。

在埃及进行的一项随机安慰剂对照临床试验中，40 名入组的慢性肾病 (CKD) III 期和 IV 期患者被分为两组。第一组患者接受两剂 MSC-sEV 制剂，而安慰剂组则静脉注射生理盐水。通过估计的肾小球滤过率 (eGFR)、尿白蛋白肌酐比、血尿素和血清肌酐水平评估肾功能。通过测定血液中 TNF-α、TGF-β1 和 IL-10 的水平来评估炎症免疫活性。与安慰剂组相比，MSC-sEV 治疗组表现出改善的 CKD 症状，这反映在肌酐清除率上。这种改善伴随着 MSC-sEV 治疗患者血浆中 TGF-β1 和 IL-10 浓度的显着增加以及 TNF-α 水平的显着下降。

在这两种情况下，都观察到了有希望的治疗效果，没有报告或观察到副作用。最近，骨髓来源的 MSC-sEV 制剂被应用于 24 名 COVID-19 患者，没有显示出任何副作用。不幸的是，作者没有报告有关他们的 MSC-sEV 产品的详细信息，对于结果仍有太多问题悬而未决。

1.6 MSC-EV 产品的免疫调节活性

显然，MSC-sEVs 可以通过不同的机制来改善各自疾病的症状。它们的确切作用机制 (MoA) 尚不清楚。然而，它们调节免疫反应和将免疫系统从急性炎症状态转变为调节状态（即从防御转变为耐受）的能力似乎是它们的关键功能之一。

其中，MSC 的抑制作用- 已在体外报道了 DCs 上的 EV。MSC-EV 添加到人单核细胞衍生的 DC 可降低 DC 成熟和激活标志物 CD83、CD38 和 CD80 的表达，减少促炎细胞因子 IL-6 和 IL-12p70 的分泌，并增加抗炎细胞因子 TGF- β。

同样在体外，将 MSC-sEV 添加到经典激活的 (M1) 骨髓衍生巨噬细胞中显着降低了促炎 M1 标志物的 mRNA 水平，例如 CCL5、IL-6 和 TNF-α。值得注意的是，MSC-sEVs 还可以调节已经 M2 极化的巨噬细胞。例如，它们显着抑制了 Resistin 样 α 和 CD206 的诱导并增强了 M2 衍生的精氨酸酶 1 (Arg1) 表达水平。

MSC-sEV 对巨噬细胞极化对 M2 免疫调节表型的影响也已在脊髓动物模型中得到证实损伤和肾损伤。在急性肾损伤模型中，MSC-EV 治疗通过增加抗炎细胞因子和减少巨噬细胞和淋巴细胞的局部侵袭而显示出免疫调节作用。事实上，MSC-sEV 的免疫调节特征现在已经在几种疾病模型中描述，这意味着免疫调节是拟议的 EV 介导的 MoA 的重要组成部分，有助于 MSC-sEV 的促再生作用。

再加上观察到 MSC-sEV 制剂在许多疾病模型（包括 ARDS 和败血症）中调节免疫反应，我们认为 MSC-sEV 疗法确实可能是 COVID-19 患者的有效治疗选择。

然而，再加上耐受性诱导在 GvHD 和其他无菌、非病毒诱导的疾病中似乎是有益的，但需要考虑在存在复制病原体的情况下的严重不良反应。假设，病毒和细菌可以在耐受性环境中以无法控制的方式传播。

尽管已经报道了 MSCs 及其分泌蛋白组的抗菌活性以及 MSC-EV 抗流感活性，但研究人员仍然保持谨慎，并将此问题视为在应用 MSC-sEV 产品之前应仔细解决的几个问题之一对疾病促进、复制病原体的患者。

1.7 MSC-EV产品介导的其他活动

除了它们的免疫调节特性外，MSC-EVs 还诱导最终促进成功组织再生所需的其他促再生过程。例如，MSC-EVs 已在机制上被证明可以增加受损细胞中的 ATP 水平，降低氧化应激和细胞损伤的严重程度，并恢复细胞代谢活动。

此外，MSC-sEV 制剂具有促血管生成活性。在我们前面提到的在缺血性中风模型中，应用的 MSCs 和 MSC-sEVs 都通过增加神经祖细胞的存活率来促进神经发生，从而在缺血 4 周后导致更高的神经元密度。

同样，促进了产生新内皮细胞的血管生成过程。因此，MSC-EV 给药增加了内源性神经生成和血管生成。与作者的研究一致，在大鼠创伤性脑损伤模型中，MSC-sEV 制剂给药后的功能恢复与血管生成促进活性相关。促血管生成潜力也在被设计为过度表达 CXCR4 的 MSCs 的 EV 制剂中恢复。

在心肌梗死模型中，MSC-EV 给药导致心肌细胞中 VEGF、IGF-1α 和 pAkt 的上调和 caspase-3 的下调。此外，血管形成增强。同样在肾损伤模型中，MSC-sEV 治疗被发现除了内源性肾细胞的扩增外，还能促进血管生成。

总之，MSC-EV 显然是以多模块方式运行的。到目前为止，主要研究了它们的免疫调节和促血管生成过程。然而，它们也可能发挥抗凋亡作用、恢复能量并实现我们可能尚未意识到的其他一些功能。

由于在 MSC 领域观察到的异质性，不太可能所有机制在所有不同的目标疾病中都同等重要。似乎更合理的是，根据目标疾病需要不同的功能模式。此外，MSC 不是统一的细胞类型。它们有一些共同特征，但在表型和功能上也可能不同。MSC 和 MSC-EV 异质性将在下一段中更详细地讨论。

1.8 MSC-sEV 制剂的异质性

将 MSC-sEV 转化为临床的一个重要考虑因素是，单个 MSC-sEV 制剂的治疗潜力可能因独立制剂而异。MSCs 已经被认为是一种异构的细胞实体。无论来源如何，来自特定来源的 MSC 在大小和真正 MSC 标记蛋白的表达水平上可能不同。

根据作者自己的经验，我们观察到基质 MSC 功能的组织特异性和个体差异，即他们支持原始造血细胞。虽然我们假设存在不同的 MSC 亚型，它们的治疗潜力很可能不同，但我们不知道有任何公认的区分不同 MSC 亚型的标准。

然而，在从不同供体的骨髓来源的 MSC 甚至是同一供体的独立扩增的 MSC 生产 sEV 后，我们可重复地观察到获得的 MSC-sEV 产品的体内和体外免疫调节能力的分子变化和功能差异.具体而言，在比较独立 MSC-sEV 制剂的细胞因子含量后，我们监测了促炎和抗炎细胞因子浓度的差异。

在功能水平上，作者最近发现独立的 MSC-sEV 制剂具有许多关于它们的 sEV 含量在体外和体内仍然不同且可重复地调节 T 细胞活性。最近，我们研究了它们在多供体混合淋巴细胞反应 (mdMLR) 测定中调节免疫反应的功能特性以及它们抑制优化的 aGvHD 小鼠模型中的 aGvHD 症状。

值得注意的是，具有体外免疫调节能力的 MSC-sEV 制剂也能够在体内调节 aGvHD 症状。然而，一部分样本未能在两种检测中显示出功效。相比之下，在没有将体内结果与 mdMLR 检测结果相关联的情况下，我们还观察到独立的 MSC-sEV 制剂提供了不同的调节缺血性中风症状的能力model.51

因此，在我们手中，相关比例的独立 MSC-sEV 制剂未能在各种动物模型中介导治疗效果。在发现可靠的替代标志物并对其进行鉴定之前，我们认为必须对治疗性 MSC-EV 制剂进行功能测试，最好是在已被鉴定为效力测定的测定中。值得注意的是，效力测定必须满足监管机构接受的若干要求，而不仅仅是提供有关治疗剂效力信息的功能测定。

除了我们的 MSC-sEV 产品效力的可变性外，其他 MSC-sEV 产品的效力可能取决于亲本 MSCs 的来源。我们还不知道除骨髓以外的任何其他来源的 MSCs 是否可以提供加速的治疗活性，甚至不知道除 MSCs 之外的其他细胞类型是否会释放更有效的 EV。当然，细胞固有特性决定了 sEV 产品的治疗效力，而且从细胞培养条件开始的生产过程通过 CM 收获程序和下游加工方法的间隔肯定会影响所得 sEV 产品的效力。

由于此讨论超出了本章的范围，我们希望参考解决这些问题的白皮书。除了这些白皮书中提出的建议之外，我们想向任何打算通过实验接近治疗性 EV 领域的人推荐还要研究和考虑国际细胞外囊泡协会 (ISEV) 的更一般性建议。尽管指南写得很好，但它们很浓缩，可能会让 EV 小说家不知所措。因此，我们强烈建议任何打算通过实验进入细胞外囊泡领域的人与该领域的专家联系。为了促进 EV 研究和支持 EV 小说家，除了 ISEV 之外，还成立了许多国家 EV 协会。例如，德国细胞外囊泡协会（GSEV）成立于 2017 年。

1.9 关键信息

细胞外囊泡目前是一个热门话题，为生命科学领域提供了许多有希望的方面。各种细胞类型的 sEV，尤其是 MSC，似乎通过调节各种疾病的免疫系统来介导促再生作用。临床前数据，辅以在人类中的一些应用，预测了巨大的治疗潜力。然而，细胞外囊泡领域还很年轻，我们必须应对几个挑战才能将细胞外囊泡准确地转化为常规诊所。许多这些挑战，包括异质性问题，最近已在 ISCT 和 ISEV 的立场文件中在 COVID-19 患者的 MSCs-EV 治疗的背景下进行了讨论，但也与所有其他临床 sMSC-EV 应用相关。