T-charge快速生产工艺介绍
体外延长T细胞培养期会耗尽与提高抗肿瘤功效相关的初始和干细胞记忆T细胞(Tscm)亚群的CAR-T最终产物。YTB323是一种以CD19为导向的自体CAR-T细胞疗法，制造过程大大简化，消除了培养周期长等复杂性。这种改进的T-Charge™工艺保留了T细胞干性，这是与治疗潜力密切相关的重要特征，从而增强了CAR-T细胞的扩增能力和更强的抗肿瘤活性。
T-charge快速生产工艺方法
新的T-Charge™制造平台在临床前环境中进行了评估，该平台将离体培养时间缩短至约24小时，制造最终产品的时间不到2天。T细胞从健康供体白细胞分离中富集，然后用慢病毒载体激活和转导，该载体编码用于tisagenlecleucel的相同CAR。培养约24小时后，收获、洗涤和配制细胞(YTB323)。同时，使用传统的体外扩增CAR-T制造方案（TM工艺）从相同的健康供体T细胞和相同的慢病毒载体生成CAR-T细胞（CTL*019）。制造后，CAR-T产品在免疫缺陷NSG小鼠（NOD-scid IL2Rg-null）的体外和体内T细胞功能测定中进行了评估，该小鼠接种了前B-ALL细胞（NALM6）或DLBCL细胞线(TMD-8)以评估抗肿瘤活性和CAR-T扩增。
T-charge快速生产的试验结果
YTB323 CAR-T产品，通过这种新型无扩展制造工艺生产，保留了输入白细胞分离术的免疫表型；具体而言，如流式细胞术所示，保留幼稚/Tscm细胞（CD45RO-/CCR7+）。相比之下，体外扩增的过程产生的最终产物主要由中央记忆T细胞 (Tcm) (CD45RO+/CCR7+) 组成（图 A）。
大量和单细胞RNA测序实验说明了支持保留初始表型的进一步证据，比较了使用T-Charge™协议生成的CAR-T的白细胞分离术和最终产物。
YTB323 CAR-T细胞效力在体外使用细胞因子分泌试验和肿瘤重复刺激试验进行评估，旨在测试细胞产物的持久性和耗竭。与CTL*019相比，CD19特异性激活后，YTB323 T细胞的IL-2和IFN-γ分泌水平高出10到17倍。
此外，YTB323细胞能够以低30倍的效应物：肿瘤细胞比率控制肿瘤，并且在重复刺激试验中至少再进行7次刺激。两种测定都清楚地证明了YTB323 CAR-T细胞在体外的效力增强。
YTB323细胞效力的最终临床前评估是通过与CTL*019比较，在多剂量免疫缺陷NSG小鼠模型中对B细胞肿瘤的体内扩增和抗肿瘤功效。每周通过流式细胞术分析血液中CD3+/CAR+ T细胞的扩增，持续长达4周。YTB323和CTL*019均观察到剂量依赖性扩增（Cmax和AUC 0-21d）。与多个剂量的CTL*019相比，YTB323的Cmax高≈40倍，AUC0-21d高≈33倍。观察到与CTL*019相比，YTB323 的峰值扩增(T max)至少延迟1周，这支持了扩增的增加是由YTB323分化程度较低的T细胞表型驱动的。与CTL*019所需的0.5×106 CAR+细胞相比，YTB323 在0.1×106 CAR+细胞的较低剂量下控制NALM6 B-ALL肿瘤生长（图 B）。在 DLBCL模型TMD-8中，只有YTB323能够控制肿瘤，而CTL*019在各个剂量组导致肿瘤进展。YTB323细胞以较低剂量控制肿瘤的这种能力证实了它们的稳健性和效力。
用于YTB323的新型制造平台T-Charge™被简化、缩短且无需扩展。因此，它保留了T细胞干性，与改进的体内CAR-T扩增和抗肿瘤功效相关。与获批的CAR-T疗法相比，YTB323有可能在各自较低的剂量下实现更高的临床疗效。T-Charge™旨在彻底改变CAR-T制造，同时提高长期深度响应的可能性。
T-Charge制造的细胞的临床试验
这项I期、多中心、剂量递增研究(NCT03960840)正在评估YTB323在B细胞恶性肿瘤患者中的安全性和初步疗效。这里展示的结果集中在DLBCL队列上。符合条件的患者是入组时患有可测量疾病、ECOG 0-1和r/r DLBCL在≥2线先前治疗（包括自体造血干细胞移植(aHSCT)后）的成人。患者接受了剂量水平1（DL1；1-2.5×106 CAR+细胞）、DL2（5-12.5×106 CAR+细胞）或DL3（25-40×106 CAR+细胞）的单剂量YTB323。YTB323之前的桥接治疗是可选的。主要终点是前28天的剂量限制毒性(DLT)发生率和确定推荐的II期剂量(RP2D)的安全性。次要终点是细胞动力学、当地研究者评估的总反应率 (ORR)、反应持续时间和总生存期。
T-Charge制造的细胞的临床试验结果
截至2021年4月16日，15名r/r DLBCL患者输注了YTB323：DL1时4人，DL2 时10人，DL3时1人（图，DL1和DL2的n=14）。中位年龄为65岁；大多数(60%)接受过2线治疗，4人(27%) 接受过aHSCT。无论研究药物关系如何，都报告了所有不良事件。
在可评估安全性的15名患者中，4名患者(27%)报告了至少1次3级(Gr) AE，6名(40%)报告了至少1次4级AE，2名(13%)报告了至少1次5级AE。最常报告的Gr3/4 AE是血小板减少症(n=2, 13%)、中性粒细胞减少症(n=3, 20%)和中性粒细胞计数减少(n=3, 20%)。7名患者(47%)有神经系统AE，其中2起事件 (13%)被认为是严重的-Gr3周围神经病变（不相关）和Gr2癫痫发作（免疫效应细胞相关神经毒性综合征3级，与治疗）。4名患者(27%)经历了细胞因子释放综合征(CRS)，其中3名 (20%)Gr1/2和1(7%)名4(Lee et al, 2014)符合DLT 标准。分别有2例（13%）和1例（7%）患者使用托珠单抗和皮质类固醇治疗 CRS。试验中有4例死亡，均与YTB323无关：2例死于疾病进展，2例死于败血症（DL1时1例，DL3时1例）。DL1至CRS发病的中位时间为9天（范围，9-9天），DL2为11天（范围，8-17天）。观察到初步的剂量依赖性反应。在DL1时，有4名患者在Mo3时可评估疗效，ORR和CR率均为25%（95%CI，0.6%-80.6%）。在 DL2时，有8名患者在Mo 3时可评估疗效，其中2名患者在输注YTB323之前处于 CR中；ORR和CR率均为75%（95% CI，34.9%-96.8%）。
在CD3+细胞中13.6% CAR+或32,100拷贝/µg DNA的DL2处输注后，观察到剂量依赖性扩增（Cmax 和AUC 0-28d）。尽管长期持续性尚无法评估，但在DL2的8名患者中，进行3个月的随访，其中3名通过流式细胞术检测到CAR表达（≥1%）。峰值扩张时间 (Tmax) 与峰值细胞因子水平 (输注后约16天) 一致。YTB323的新型制造方法允许在最终产品中保存CD4和CD8幼稚/Tscm细胞，如流式细胞术所确定。批量和单细胞RNAseq分析表明YTB323保留了幼稚的干细胞样表型（临床试验资料：CYTB323A12101）.
DL3正在进行YTB323招募；RP2D仍有待确定。在DL2，YTB323显示出有希望的疗效和良好的安全性。当前数据支持在r/r DLBCL pts中继续开发YTB323。
1、Preservation of T-Cell Stemness with a Novel Expansionless CAR-T Manufacturing Process, Which Reduces Manufacturing Time to Less Than Two Days, Drives Enhanced CAR-T Cell Efficacy
2、A First-in-Human Study of YTB323, a Novel, Autologous CD19-Directed CAR-T Cell Therapy Manufactured Using the Novel T-ChargeTM platform, for the Treatment of Patients (Pts) with Relapsed/Refractory (r/r) Diffuse Large B-Cell Lymphoma (DLBCL)
编辑：小果果，转载请注明出处：https://www.cells88.com/cells/myxb/8266.html
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